Набір барвників за Грамом

Метод Грама — метод забарвлення мікроорганізмів для дослідження, що дозволяє диференціювати бактерії за біохімічними властивостями їх клітинної стінки.

За Грамом бактерії забарвлюються аніліновими барвниками — генціановий або метиловим фіолетовим та ін., потім барвник фіксують розчином йоду. При подальшому промиванні забарвленого препарату спиртом.Після спирту наносять фарбу нейтральний червоний. Ті види бактерій, які виявляються пофарбованими в синій колір , називають грампозитивними бактеріями (позначаються Грам (+)), і грамнегативних (Грам (−)), які фарбуються в червоний.

Фіксація

При фіксуванні мазок закріплюється на поверхні предметного скла, і тому при подальшому фарбуванні препарату мікробні клітини не змиваються. Крім того, убиті мікробні клітини фарбуються краще, ніж живі.

Розрізняють фізичний спосіб фіксації, в основу якого покладено вплив високої температури на мікробну клітину, і хімічні способи, що передбачають застосування хімічних засобів, що викликають коагуляцію білків цитоплазми.

Фізичний спосіб фіксації

Предметне скло з препаратом беруть пінцетом або I і II пальцями правої руки за ребра мазком догори і плавним рухом проводять 2-3 рази над верхньою частиною полум'я пальника. Весь процес фіксації повинен займати не більше 2 с.

Надійність фіксації перевіряють наступним прийомом: вільну від мазка поверхню предметного скла прикладають до тильної поверхні лівої кисті. При правильному фіксації мазка скло повинне бути гарячим, але не викликати відчуття опіку (70-80 °C).

Хімічний спосіб фіксації

Для фіксації мазків застосовують метиловий спирт, ацетон, суміш Нікіфорова (суміш етилового спирту 96 % і наркозного ефіру у співвідношенні 1:1), рідину Карнуа (етилового спирту 96 % — 60 %, хлороформу 30 %, крижаної оцтової кислоти 10 %), спирт-формол (40 % формалін 5 мл, етиловий спирт 96° — 95 мл). Предметне скло з висушеним мазком занурюють в склянку з фіксуючим речовиною на 10-15 хвилин і потім висушують на повітрі. Застосовується також фіксація в парах 40 % формаліну протягом декількох секунд.